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為了保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全,保護(hù)人類健康,許多國(guó)家都禁止在食源性動(dòng)物的生產(chǎn)中使用鹽酸克倫特羅,美國(guó)食品與藥品監(jiān)督管理局(FDA)將肉品中的鹽酸克倫特羅殘留作為必檢項(xiàng)目,歐盟也嚴(yán)禁在飼料中添加“瘦肉精”類藥物。我國(guó)雖然于2000年提出禁止使用“瘦肉精”類藥物,但在畜牧業(yè)生產(chǎn)中“瘦肉精”的使用仍屢禁不止,如:在2011年河南省和江蘇省發(fā)生濟(jì)源雙匯的“瘦肉精”事件以及2021年“3.15晚會(huì)”中曝光的滄州青縣瘦肉精羊肉問題,都具有很大的社會(huì)影響力。
試劑
乙酸乙酯、異丙醇、甲醇均為色譜純;甲酸、高氯酸、氨水、氫氧化鈉;β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶。
0.2mol/L乙酸鈉緩沖液:稱取13.6g乙酸鈉,溶解于500ml水中,用適量乙酸調(diào)節(jié)pH至5.2。
標(biāo)準(zhǔn)品:萊克多巴胺鹽酸鹽,克倫特羅鹽酸鹽,沙丁胺醇,特布他林硫酸鹽,100ng/ml。
內(nèi)標(biāo)物:沙丁胺醇-D3,克倫特羅-D9,10ng/ml。
樣品制備
酶解
準(zhǔn)確稱取5g(**到0.01g)經(jīng)搗碎的樣品于50mL離心管內(nèi),加入0.2moL/L乙酸鈉溶液(pH=5.2)20mL,再加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶100μL,漩渦混勻,于37℃下避光水浴水解12h。
提取
添加1ml的內(nèi)標(biāo)工作液于待測(cè)樣品中,加蓋置于水平振蕩器震蕩15min,5000r/min高速離心10min,準(zhǔn)確取10mL上清液于另一50mL離心管中,用高氯酸調(diào)節(jié)PH至1.0±0.3,4000r/min離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管中,用10moL/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至11,加入4~5g氯化鈉,加入異丙醇:乙酸乙酯=6:4 15mL,充分提取,4000r/min離心5min,吸取全部有機(jī)相到??迫詣?dòng)氮吹濃縮儀EVA-60plus 50℃下氮?dú)獯蹈?,加?.2M乙酸銨溶液5mL溶解,超聲混勻,使殘?jiān)浞秩芙夂髠溆谩?/span>
凈化
將MCX固相萃取柱安裝在Raykol Fotector Plus高通量全自動(dòng)固相萃取儀上,依次用甲醇3 mL、水3 mL活化。備用液全部過(guò)柱,用水2 mL、2%甲酸水2ml、甲醇2 mL依次淋洗,抽干,用5%氨水甲醇溶液2 mL洗脫,收集洗脫液,使用EVA-60plus全自動(dòng)氮吹濃縮儀于40℃水浴氮?dú)獯蹈?,?0%乙腈水溶液(含0.1%甲酸)1.0 mL溶解,濾過(guò),液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。
瘦肉精檢測(cè)儀